活細(xì)胞收貨指南

活細(xì)胞收貨指南：

查  驗(yàn) —— 名稱&破損 
收到細(xì)胞后請(qǐng)及時(shí)核對(duì)培養(yǎng)瓶上標(biāo)注的細(xì)胞名稱是否與訂購的細(xì)胞名稱一致，檢查細(xì)胞瓶有無破損或漏液等異常情況。
處  理 —— 靜置拍照
打開包裝后，將細(xì)胞瓶外包裝噴灑酒精，再拿到細(xì)胞間；在細(xì)胞間內(nèi)用75%酒精消毒，在超凈工作臺(tái)內(nèi)將瓶口的封口膜拆掉后，將細(xì)胞放入37℃ CO? 培養(yǎng)箱中靜置2-4小時(shí) (貼壁細(xì)胞在運(yùn)輸過程中發(fā)生細(xì)胞脫落，這是正?，F(xiàn)象),待細(xì)胞穩(wěn)定后再做后續(xù)處理；顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照保存，前三天照片為重要售后依據(jù)，如出現(xiàn)污染，請(qǐng)標(biāo)明污染類型及相應(yīng)證據(jù)(如細(xì)胞照片、判斷依據(jù)等)并在收到之日起三天內(nèi)與我們聯(lián)系。
貼壁細(xì)胞：
細(xì)胞密度未超過80%時(shí)，將細(xì)胞瓶?jī)?nèi)的完全培養(yǎng)基收集至離心管中，留5mL 完全培養(yǎng)基，繼續(xù)放入37℃  CO? 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；細(xì)胞密度超過80%時(shí)，根據(jù)情況選擇傳代或凍存。
注意：傳代后避免頻繁開關(guān)培養(yǎng)箱或移動(dòng)培養(yǎng)瓶，這些操作均會(huì)影響細(xì)胞的貼壁， 一般傳代12小時(shí)后再行觀察。
懸浮細(xì)胞 ：  懸浮細(xì)胞穩(wěn)定2-4小時(shí)后將細(xì)胞懸液收集至離心管內(nèi)離心，離心后上清(完全培養(yǎng)基)可收集至離心管中， 沉淀制備成細(xì)胞懸液接種至新的細(xì)胞瓶中，補(bǔ)進(jìn)適量完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)即可。
待細(xì)胞密度超過80%時(shí)，可進(jìn)行傳代，傳代方法可選擇“半換法”或“離心法”。
半換法：直接向培養(yǎng)瓶中添加等體積的新鮮培養(yǎng)液，然后將細(xì)胞吹打均勻后按比例移入新的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。
離心法：將細(xì)胞瓶?jī)?nèi)的細(xì)胞懸液收集至離心管中進(jìn)行離心，離心后去上清，沉淀制備成細(xì)胞懸液吹打均勻后 接種至新的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。
凍  存—— 離心收集細(xì)胞后，加入適量?jī)龃嬉海辜?xì)胞密度達(dá)到1×10/mL, 輕輕混勻，將凍存管放入程序降溫盒并置于-80℃冰箱，24小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮長(zhǎng)期保存。
凍存液配方：70%完全培養(yǎng)液+20% FBS+10%DMSO 。